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酵母系统蛋白表达纯化

服务号:

ABF4001

目录价:

¥9500.00

服务周期:

7-10周

服务分类:

酵母系统蛋白表达纯化

毕赤酵母表达系统介绍

毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是近年来发展迅速、应用广泛的一种真核表达系统。它是甲醇营养型酵母菌,有两个乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX)编码基因AOX1和AOX2,两种序列相似,AOX1基因严格受甲醇诱导和调控。当甲醇为唯一碳源时,AOX1启动子可被甲醇诱导,启动乙醇氧化酶的表达,从而用甲醇进行代谢,含AOX1启动子的质粒可用来促进编码外源蛋白的目的基因的表达。

表达菌株特点

GS115:AOX1和AOX2基因都正常表达AOX蛋白(乙醇氧化酶),甲醇的利用率高,接近于野生型,属于甲醇快速利用型(Mut+)

KM71:AOX1基因被大部分剔除,只能利用AOX2为AOX编码,甲醇的利用速率变慢,表现为甲醇慢利用型(Muts)

外源基因的整合方式不同会导致表达菌株的表型不同:

菌株表型

限制酶

插入位点

GS115表型

KM71表型

Sa1I/Stul

HIS4

HIS+Mut+

HIS+MutS

Sacl

5’AOX1

HIS+Mut+

HIS+MutS

Bg1II

取代AOX1

HIS+MutS

HIS+MutS

常用表达载体及筛选标记

载体信息

达类型

载体名称

筛选标记

启动子

胞内表达

pAO815

HIS4

AOX1

pPIC3K

HIS4

AOX1

pPUC3.5K

HIS4

AOX1

分泌表达

pPICZα,A,B,C

Bler

AOX1

pPIC9K

HIS4

AOX1

信号肽

对于胞外表达的蛋白除了可以用载体自带的信号肽,还有以下信号肽可供选择:

信号肽序列

信号肽

蛋白序列

αMF*

MRFPS IFTAV LFAAS SALAA PVNTT TEDET AQIPA EAVIG YSDLE GDFDV AVLPF SNSTN NGLLF INTTI ASIAA KEEGV SLEKR EAEA

Dse4

MSFSS NVPQL FLLLV LLTNI VSG

Exg1

MNLYL ITLLF ASLCS A

Scw11

MLSTI LNIFI LLLFI QASLQ

Salb

MKWVT FISLL FLFSS AYS

毕赤酵母表达系统的优势

1.      含有特有的强有力的AOX(醇氧化酶基因)启动子,用甲醇可严格地调控外源基因的表达。

2.      培养成本低,产物易分离,毕赤酵母所用发酵培养基成本合理,一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇,其余为无机盐,培养基中不含蛋白,有利于下游产品分离纯化。

3.      外源蛋白基因遗传稳定,外源基因能以高拷贝数整合到毕赤酵母基因组中,不易丢失并能得到高表达菌株。

4.      作为真核表达系统,毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能。

df888经典版网页登录生物酵母表达系统的优势

1.      具备完备的毕赤酵母表达平台,可以根据蛋白特性或客户的需求设计不同的实验方案;

2.      具有高通量的筛选平台,可以快速有效的得到最佳表达条件;

3.      具有大规模发酵生产能力

服务组合

服务项目(Service Items)

周期(周)Time(weeks)

蛋白分析与密码子优化

项目开始前完成

基因合成

2~4

亚克隆

1

基因表达纯化测试

2

发酵与纯化

1~2

总计

6~9


服务列表


4.1.2 酵母系统蛋白表达纯化ABF4001

 

服务项目名称

服务编号

 

酵母表达系统-(G418加压套餐)

 

ABF4001

 

步骤

服务内容

服务描述

价格

周期

1

密码子优化,基因合成

针对蛋白信息,技术人员进行结构预测分析,风险评估,方案制作;采用三密码子或多样三密码子规则,优化密码子序列,验证蛋白的序列氨基酸种类和比例,并进行基因合成,避免移码突变。

1.50/bp

2~3

2

亚克隆

利用PCR、胶回收、等技术手段将目的蛋白的基因导入适合载体中,构建稳定质粒

500

3~5

3

梯度加压筛选(G418

保证细胞培养的条件合适的前提下,(如培养基选用适当,营养成分的适量,培养液新鲜等条件),使细胞正常的生长和存活,逐渐增加G418浓度,每一次等细胞适应这个压力并恢复正常生长后,再继续加压;筛选出最适G418浓度

2500

1

4

表达小试阶段

2个克隆摇瓶,优化表达条件(甲醇浓度和诱导时间梯度优化)

1500

1~2

5

纯化测试

最优克隆+最优表达条件100ml表达纯化,小量表达测试蛋白质量以及条件是否达标

1500

1~2

6

1L发酵纯化

依据加压筛选、纯化测试、表达小试中的条件表达蛋白

3500

2~3

7

干冰运输样品

免费运输

0

 

8

实验报告

实验步骤中细节,包含表达流程,表达水平,筛选条件,SDS-PAGE图等;或补充客户所需质量检测报告(额外收费)。

0

 

 

合计

 

9500(不含基因合成)

7~10



酵母表达系统表达蛋白

 

服务项目名称

服务编号

 

酵母表达系统-(zeocin加压套餐)

 

ABF4001-2

 

步骤

服务内容

服务描述

价格

周期

1

密码子优化,基因合成

针对蛋白信息,技术人员进行结构预测分析,风险评估,方案制作;采用三密码子或多样三密码子规则,优化密码子序列,验证蛋白的序列氨基酸种类和比例,并进行基因合成,避免移码突变。

1.50/bp

2~3

2

亚克隆

利用PCR、胶回收、等技术手段将目的蛋白的基因导入适合载体中,构建稳定质粒

500

3~5

3

梯度加压筛选(zeocin

保证细胞培养的条件合适的前提下(如培养基选用适当,营养成分的适量,培养液新鲜等条件),使细胞正常的生长和存活,逐渐增加zeocin浓度,每一次等细胞适应这个压力并恢复正常生长后,再继续加压;筛选出最适zeocin浓度

2500

1

4

表达小试阶段

2个克隆摇瓶,优化表达条件(甲醇浓度和诱导时间梯度优化)

1500

1~2

5

纯化测试

最优克隆+最优表达条件100ml表达纯化,小量表达测试蛋白质量以及条件是否达标;可交付蛋白样品

1500

1~2

6

1L发酵纯化

依据加压筛选、纯化测试、表达小试中的条件表达蛋白

3500

2~3

7

干冰运输样品

免费运输

0

 

8

实验报告

根据顾客需求提供全程实验报告(可包括表达时检测的SDS-PAGE以及其他质控指标)

0

 

 

合计

 

9500(不含基因合成)

7~10


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